Déclaration d’éthique
Le comité institutionnel de soins et d’utilisation des animaux de l’Institut de recherche de médecine tropicale (RITM) a renoncé à l’approbation éthique, car cette étude n’a collecté que des échantillons de cerveau à partir de carcasses ou de têtes d’animaux soumises à une surveillance de routine. Pour l’autorisation de biosécurité, notre protocole de recherche a été approuvé par le comité de biosécurité de RITM (n ° 190116). Ce matériel biologique reflète les conditions pertinentes pour le diagnostic de la rage, compte tenu des espèces animales, de l’âge, du sexe, de la gestion des ménages et du temps de la mort à l’arrivée au laboratoire de diagnostic. Cette approche permet une évaluation étroitement alignée sur les circonstances réelles du diagnostic de la rage sans causer de mal aux animaux supplémentaires. Dans cette étude, nous n’avons utilisé que des informations sur les animaux collectées pour une surveillance de routine après avoir exclu toute information identifiable individuelle.
Site d’étude
Cette étude a été menée au Laboratoire régional de diagnostic animal du Département philippin de l’agriculture, situé dans la province de Tarlac, région 3, Philippines. Le laboratoire accepte des échantillons pour les tests de diagnostic animal dans la région. La population de la région est de 12 millions (recensement de 2020), ce qui en fait la deuxième zone la plus densément peuplée des Philippines après le métro de Manille. La région a l’incidence la plus élevée de la rage dans le pays, avec 54 cas de rage humaine et 368 animaux enragés signalés en 2023 (rapport non officiel par le ministère de la Santé des Philippines et le ministère de l’Agriculture, Office régional).
Échantillons
Le laboratoire fournit des tests libres de la rage animale par DFAT aux agences gouvernementales locales et aux résidents des provinces du nord de la région. Les animaux soupçonnés de rage sont généralement trouvés morts ou euthanasiés par les autorités locales. Par la suite, une tête d’animal est retirée et transportée au laboratoire pour les tests de la rage dans des conditions congelées. En laboratoire, une méthode d’échantillonnage de paille est systématiquement utilisée pour collecter les tissus cérébraux pour le DFAT [10]. Une paille en plastique est insérée dans le foramen magnum des têtes d’animaux pour obtenir de petites portions de tissu cérébral. Dans cette étude, nous avons utilisé des têtes d’animaux qui avaient été traitées avec la méthode d’échantillonnage de la paille et testées avec du DFAT le jour où les échantillons ont été soumis. Les résultats du DFAT ont été désignés comme «Jour 0». En utilisant les résultats DFAT du jour 0 comme référence, nous avons évalué la sensibilité et la spécificité de LFD et DFAT après la décomposition. Cette étude a utilisé 26 animaux DFAT positifs et huit animaux DFAT négatifs collectés au hasard entre mars et juin 2023. Après les procédures de routine de la méthode d’échantillonnage de paille et du DFAT, le cerveau entier a été extrait après l’ouverture du crâne puis stocké dans un – Corouteau à 80 ° C.
Expérience de décomposition
Au début de chaque expérience de décomposition, 8 à 12 échantillons de cerveau ont été laissés à température ambiante à l’intérieur d’une armoire de biosécurité. Pour éviter la contamination croisée pendant les expériences de décomposition, nous avons assuré que les outils d’échantillonnage étaient remplacés et les gants ont été modifiés entre la manipulation de chaque échantillon de cerveau. De plus, chaque échantillon a été placé dans une boîte de Pétri séparée pour minimiser davantage le risque de contamination croisée. Des parties de la moelle ont ensuite été collectées après 24 h (jour 1), 72 h (jour 3) et 96 h (jour 4) et ont ensuite été utilisées pour le DFAT et le LFD. Les résultats positifs ou négatifs pour chaque animal ont été déterminés sur la base des résultats du DFAT le jour 0 et ont été comparés aux résultats des tests pour chaque échantillon collecté les jours indiqués. Le DFAT et le LFD ont été effectués immédiatement après la collection d’échantillons. Pour évaluer l’état de décomposition des échantillons de cerveau, nous avons utilisé notre système de notation original développé dans cette étude. Le système de notation a été modifié à partir de celui utilisé par le Central Animal Laboratory du Bureau of Animal Industry du Département philippin de l’agriculture. Le système de notation comprenait la forme, l’apparence, la cohérence et la couleur, chacune évaluée sur une échelle à trois points. Le score total a été utilisé pour évaluer le degré de décomposition, avec le plus haut niveau de décomposition marquant 4 points et 12 points pour aucune décomposition (fichier supplémentaire 1: tableau S1). Ensuite, la température et l’humidité de l’air atmosphérique ont été mesurées à 9h00, 13h00 et 17h00 chaque jour. Dans ce bâtiment, la climatisation fonctionne pendant la journée et est éteinte la nuit. La climatisation devrait s’activer à 9h00 du matin.
DFAT et LFD
Analyse des données
La sensibilité et la spécificité du DFAT et du LFD le jour 1, le jour 3 et le jour 4, ainsi que des intervalles de confiance à 95%, ont été déterminées avec les résultats du DFAT le jour 0 comme test de référence. Les sensibilités du DFAT et du LFD le jour 1, le jour 3 et le jour 4 ont été présentées. Nous avons analysé les intensités de bande du test et du contrôle sur les bandes LFD à l’aide du logiciel open-source ImageJ (https://imagej.net/ij/index.html) [22]. Après avoir capturé des images du LFDS par smartphone, nous avons converti ces images en niveaux de gris 8 bits pour assurer l’uniformité dans l’analyse. Le logiciel a converti chaque bande détectée en un pic qui reflétait le nombre de pixels, et la zone sous la courbe (AUC) représentait l’intensité du groupe. Nous avons calculé les rapports AUC de la bande de test à la bande témoin (rapport T / C) [23, 24]. Nous avons comparé les ratios T / C le jour 1, le jour 3 et le jour 4 en utilisant le test de rang signé de Wilcoxon. Les échantillons sans bandes positifs détectés, ni lorsque nous n’avons pas obtenu d’images (id = 110, 207), ont été exclus de l’analyse. L’étude a adhéré aux lignes directrices décrites dans l’énoncé de la CDROR (renforçant la déclaration des études observationnelles en épidémiologie) (fichier supplémentaire 2: tableau S2). Nous avons mené cette étude en tant qu’essai pilote initial, sans effectuer un calcul de la taille de l’échantillon pour la précision diagnostique. Au lieu de cela, l’étude a été conçue autour de la durée de l’étude disponible et du nombre d’échantillons de cerveau qui pourraient être stockés dans l’installation de biosécurité à chaque fois, qui avait une capacité maximale de 12.
#Évaluation #des #dispositifs #découlement #latéraux #pour #diagnostic #rage #dans #des #échantillons #cerveau #animal #décomposés #Médecine #tropicale #santé